Palavras-chave
estrés oxidativo
normoxia
Como Citar
Resumo
Introducción: La hipoxia es una condición de deficiencia de oxígeno en las células de los tejidos que puede ocurrir en situaciones fisiopatológicas, como el cáncer (1,2). Por otro lado, el estrés oxidativo también es una característica frecuente del microambiente tisular, y juega un papel clave en la fisiología de las células tumorales a medida que crecen y avanzan hacia el estroma (3). Ambos procesos están íntimamente relacionados, por lo tanto, ensayos que permitan visualizar
simultáneamente el estado hipóxico y oxidativo de las células en condiciones de bajo nivel de oxígeno, podrían contribuir a modelar la interacción entre la hipoxia y el estrés oxidativo in vitro.
Objetivos: Estudiar los niveles de hipoxia y estrés oxidativo simultáneamente en células HaCaT transducidas con los oncogenes del VPH-18 (HaCaT E5/E6/E7-18) (4) mediante la variante del método de hipoxia inducida por cubreobjetos (5). Evaluar el metabolismo de dichas células en condiciones de normoxia e hipoxia.
Métodos: Se utiliza la variante del método de hipoxia inducida por cubreobjetos para generar gradientes de hipoxia intracelular en HaCaT E5/E6/E7-18. Para visualizar este gradiente se utiliza una sonda que detecta la hipoxia en células vivas. A su vez, es posible detectar en simultáneo niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) mediante el empleo de una sonda específica. Con el fin de medir la respiración y la acidificación en las células HaCaT E5/E6/E7-18 en relación a las células control, se utiliza el equipo “Seahorse XF24 Extracellular Flux Analyzer” de la Facultad de Medicina. Además, para estudiar los cambios metabólicos en condiciones de hipoxia en relación a normoxia, se miden cambios de pH y producción de CO2 mediante el Radiómetro ABL800 Flex del Hospital de Clínicas.
Resultados y Discusión: Observamos niveles más altos de hipoxia en células alejadas de una fuente de oxígeno y un descenso en los niveles de estrés oxidativo. Además, observamos que las células HaCaT E5/E6/E7-18 presentan una mayor tasa de acidificación extracelular, y un mayor consumo de oxigeno en relación a las células control. Además, observamos que HaCaT E5/E6/ E7-18 en condiciones de hipoxia presentan una disminución de pH y un aumento en la presión de CO2 en relación a normoxia.
Referências
2. Lee, N.S. Chandel, M.C. Simon, Cellular adaptation to hypoxia through hypoxia inducible factors and beyond, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 21. 2020; 268–283. https://doi.org/10.1038/s41580-020- 0227-y.
3. R.D. Guzy, B. Hoyos, E. Robin, H. Chen, L. Liu, K.D. Mansfield, M.C. Simon, U. Hammerling, P.T. Schumacker, Mitochondrial complex III is required for hypoxia-induced ROS production and cellular oxygen sensing, Cell Metab. 1. 2005; 401–408.https://doi.org/10.1016/j.cmet.2005.05.001.
4.Hochmann, J., Parietti, F., Martínez, J., Lopez, A.C., Carreño, M., Quijano, C., Boccar-do, E., Sichero, L., Möller, M.N., Mirazo, S., Arbiza, J.. Human papilloma-virus type 18 e5 oncoprotein cooperates with e6 and e7 in promoting cell viability and invasion and in modulating the cellular redox state. Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 2020;115, e190405 . https://doi.org/10.1590/0074-02760190405.
5. Arocena, M; Landeira, M; Di Paolo, A Silva,A; Sotelo Silveira,J; Fernández, A; Alonso, J. Using a variant of coverslip hypoxia to visualize tumor cell alterations at increasing distances from an oxygen source, J. Cell. Physiol. 2019; jcp.28507. https://doi.org/10.1002/jcp.28507.